Estandarización de un protocolo de obtención de ADN genómico para la cuantificación de 5mC en brotes epicórmicos de Tectona grandis L.

Resumen

La presente investigación se realizó con el objetivo de definir un método de extracción y purificación que proporcionara ácido desoxirribonucleico (ADN) adecuado para determinar el porcentaje de 5 mC presente en el ADN genómico de brotes epicórmicos de Tectona grandis L. Durante la estandarización del protocolo de extracción de ADN se compararon cuatro métodos: 1- clásico basado en una solución amortiguadora salina con CTAB (hexadecil trimetil bromuro de amonio), 2- Kit de extracción de ADN de plantas DNeasy Plant Mini Kit (QIAGEN) según el protocolo recomendado por el fabricante, 3- Kit de extracción de ADN de plantas DNeasy Plant Mini Kit (QIAGEN) modificado con el empleo de fenol sin columnas de silicio, 4- Kit de extracción de ADN de plantas DNeasy Plant Mini Kit (QIAGEN) con modificaciones que incluyeron el empleo de fenol y columnas de silicio. Las muestras extraídas con el método del CTAB, generaron en su totalidad electroferogramas no válidos por la presencia de nucleósidos. En cuanto a las muestras purificadas mediante el kit de extracción DNeasy Plant Mini Kit (QIAGEN) se pudo apreciar que solo se obtuvieron electroferogramas válidos cuando se empleó el fenol y adicionalmente las columnas de silicio, verificándose la pureza de las muestras, de cuya hidrólisis se obtienen solamente desoxinucleosidos. Se logró un de método de extracción y purificación que proporcionó ADN genómico de teca, basado en el empleo de fenol y purificación del ADN con columnas de SiO_2, adecuado para determinar de forma precisa el porcentaje de metilación de residuos citosina en yemas de brotes epicórmicos de Tectona grandis L.

Palabras clave: extracción, metilación, metil citosina, purificación, Teca