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La marchitez causada por Fusarium sacchari, es una de las principales enfermedades de la caña de azúcar (Saccharum spp.) que causa considerables pérdidas económicas. Trichoderma spp. es un importante agente de biocontrol que se ha explotado eficazmente para el manejo de varias enfermedades de las plantas, incluida la marchitez en varios cultivos. El presente estudio se realizó para evaluar el potencial antagonista de Trichoderma spp. contra el patógeno de la marchitez de la caña de azúcar. Un total de 103 aislamientos de Trichoderma que comprenden 43 aislamientos establecidos a partir de suelos de la rizosfera de la caña de azúcar, así como 60 aislamientos endofíticos establecidos a partir del tejido de las raíces, hojas y tallos de la caña de azúcar, fueron evaluados por su actividad antagonista contra F. sacchari mediante la técnica de cultivo dual. Se observó una considerable variabilidad en la actividad inhibidora de los 103 aislamientos contra el organismo patógeno con una inhibición que osciló entre 1.4% y el 27.2% (SER42). En general, los aislados endofíticos de Trichoderma fueron más efectivos en la inhibición de F. sacchari en comparación con los aislados rizosféricos en estudios de cultivo dual y se seleccionaron 12 aislados endofíticos prometedores que se evaluaron más a fondo para la producción de metabolitos inhibidores solubles contra F. sacchari mediante la técnica de medios de cultivo envenenados. Se observó variabilidad entre los aislados de Trichoderma en la inhibición del crecimiento de F. sacchari con valores que oscilaban entre el 1.4% (SER 43) y el 44.2% (SER10). En general, según los ensayos in vitro, Trichoderma SER 10, aislado del tejido de la raíz de la caña de azúcar, resultó ser el más prometedor que mostró una inhibición del 44.2% del crecimiento de F. sacchari en el método de medio de cultivo envenenado y un 26.3% de inhibición en los estudios de cultivo dual. Este es el primer estudio informa sobre el potencial de control biológico de Trichoderma spp. contra F. sacchari, agente causal de la marchitez en la caña de azúcar.