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La propagación de caña de caña de azúcar (Saccharum spp.) requiere de semilla con calidad fisiológica y fitosanitaria. El trabajo se realizó con el objetivo de establecer un banco de plantas madre de caña de azúcar en condiciones semicontroladas para garantizar la eficacia de la propagación in vitro con plantas libres de Xanthomonas albilineans. Se modificó una casa de cultivo y se remodeló la instalación, se colocó malla de sombra Sarán (50%) y un sistema de riego por aspersores. El cultivo de las plantas se realizó en recipientes de plástico (volumen de 20 m³)con una mezcla de compost de cachaza y zeolita 3:1. Tallos sin síntomas de escaldadura foliar y con seis meses de cultivo de los cultivares C98-357, C97-445, y C86-156 se cortaron en segmentos con una yema. Se aplicó tratamiento hidrotérmico y posteriormente el bioestimulante VIUSID Agro^® (0.8 ml l^-1) antes de la plantación de las yemas. A los tres meses de cultivo se realizó un diagnóstico serológico para detectar la presencia de X. albilineans.  Las plantas negativas se trataron con productos bioestimulantes y se evaluó la respuesta del establecimiento in vitro. En las condiciones descritas se logró el crecimiento adecuado de las plantas. El establecimiento de un banco de plantas madre de caña de azúcar en condiciones semicontroladas y su manejo garantizaron que disminuyera la contaminación microbiana y la oxidación fenólica en la fase de establecimiento in vitro. La efectividad del tratamiento hidrotérmico combinado con las condiciones semicontroladas y el manejo de las plantas permiten disminuir la incidencia de X. albilineans.