Viola odorata L. es una planta medicinal y fuente de diferentes metabolitos secundarios. Se ha demostrado que el cultivo de callos se puede utilizar como un método eficaz para la multiplicación de plantas medicinales. El objetivo de este trabajo fue desarrollar un protocolo para desarrollar callogénesis y rizogénesis en V. odorata. Se utilizaron pecíolos y hojas como explantes para la callogénesis. Se observó una inducción significativa de callos en el medio de cultivo MS con 2 mg l-1 2,4-D + 2 mg l-1 NAA + 30 mg l-1 adenina sulfato. Se produjeron callos duros y embriogénicos con color blanco y verdoso. La masa fresca más elevada de callo se obtuvo con 2.5 mg l-1 2,4-D + 2.5 mg l-1 BAP (8.093 g) y la más baja con 0.5 mg l-1 BAP (0.295 g). Además, la masa seca más alta se obtuvo en medio de cultivo con 2 mg l-1 2,4-D + 2 mg l-1 NAA + 30 mg l-1 de sulfato de adenina (0.755 g) y la más baja con 0.5 mg l-1 TDZ (0.045 g). La inducción de raíces del callo se produjo con el uso de AIA e AIB. El número máximo de raíces y la mayor longitud de raíz (2.920 cm) se registró después de 15 a 20 días con 1.5 mg l-1 de AIB. El presente estudio revela que este protocolo podría utilizarse para la callogénesis y rizogénesis in vitro de V. odorata L.