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Comparación de tres métodos para la extracción de ARN total a partir de hojas de cacao
Resumen
El establecimiento de un método de extracción de ARN total de plantas que cumpla con los criterios requeridos de pureza y rendimiento, es un paso crítico para estudios moleculares posteriores, sobre todo en plantas que son recalcitrantes y poseen de manera natural una alta cantidad de polifenoles, polisacáridos y proteínas. Estos se han referido como los principales contaminantes en los métodos de extracción. En este trabajo se compara la eficiencia de tres métodos de extracción de ARN de hojas de cacao (Theobroma cacao L.) para emplearse posteriormente en análisis moleculares. Se siguieron los protocolos establecidos y evaluó la cantidad y calidad del ARN obtenido. Fue posible reproducir los tres métodos, aunque se constataron diferencias respecto al tiempo de desarrollo y la calidad del ARN. El mejor método para la extracción de ARN total fue el de TRI-Reagent, el cual permitió obtener ARN con las características de calidad y concentración necesarias para futuros estudios, además de la facilidad de su empleo y el número de muestras que pueden ser ensayadas.
Palabras clave: laboratorios, polifenoles, protocolo.
Referencias
Bekesiova, I, Nap JP, Mlynarova L (1999) Isolation of high quality DNA and RNA from leaves of the carnivorous plant Drosera rotundifolia. Plant Molecular Biology Reporter 17: 296-277
Chomczynski, P, Sacchi N (1987) Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenolchloroform extraction. Anal Biochem 162: 156_159
Chomczynski, P, Sacchi N (2006) The single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction: twenty-something years on. Nat Protoc 1:581_585
da Silva, AG, Micheli F, Fortes C, de Mattos JC (2003) Isolation and purification of functional total RNA from different organs of cacao tree during its interaction with the pathogen Crinipellis perniciosa. BioTechniques 35:494-500
Jones, CS, Iannetta PPM, Woodhead M, Davies HV, McNicol RJ, Taylor MA (1997) The isolation of RNA from raspberry (Rubus idaeus) fruit. Molec Biotech 8: 219_221
Loomis, WD (1974) Overcoming problems of phenolics and quinones in the isolation of plant
enzymes and organelles. Methods in Enzymology 31: 528-545
Quiñones, J, Trujillo R, Capdesuñer Y, Quirós Y, Hernández, M (2013) Potencial de actividad antioxidante de extractos fenólicos de Theobroma cacao L. (cocoa). Revista cubana de plantas medicinales 18 (2): 201-2015
Rodríguez-Ávila, NL, Narváez-Zapata JA, Aguilar-Espinoza ML, Rivera-Madrid R (2009) Full-Length gene enrichment by using an optimized RNA Isolation Protocol in Bixa orellana recalcitrant tissues. Mol Biotechnol 42:84-90
Rojas, L, Portal O, Jiménez E (2011) Extracción de ARN total en plantas y hongos filamentosos. Biotecnología Vegetal 11 (4): 213 _ 222
Salzman, RA, Fujita T, Zhu-Salzman K, Hasegawa PM, Bressan RA (1999) An improved RNA isolation method for plant tissues containing high levels of phenolic compounds or carbohydrates. Plant Molecular Biology Reporter 17: 11-17
Simo, C, Djocgoue PF, Mbouobda HD, EFFA PO, Boudjeko T, Omokolo DN (2011) Variation and heredability of polyphenoloxidasic activities in two hybrid families of Theobroma cacao L. after cocoa pods inoculation with Phytophtora magakarya Bras. et Grif. Plant Pathology Journal 10(3): 89-98
Sambrook, J, Russell DW (2001) Molecular cloning: a laboratory manual. Third edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press
Tattersall, EAR, Ergul A, AlKayal F, DeLuc L, Cushman JC, Crame, GR (2005) Comparison of Methods for Isolating High-Quality RNA from leaves of grapevine. Am. J. Enol. Vitic. 56: (4) 400-407
Wang, P, Qi M, Barboza P, Beth M, Ungerfeld E, Brent L, McAllister TA, Forster RJ (2011) Isolation of high-quality total RNA from rumen anaerobic bacteria and fungi, and subsequent detection of glycoside hydrolases. Can. J. Microbiol. 57: 590_598
Wang, X, Tian W, Li Y (2008) Development of an efficient protocol of RNA isolation from recalcitrant tree tissues. Molecular Biotechnology 38: 57-64
Wang, X , Wang B, Liu L, Cui X, Yang J, Wang H , Jiang H, Luo B, Long Z , Dou W, Zhang N, Peng D (2010) Isolation of high quality RNA and construction of a suppression subtractive hybridization library from ramie (Boehmeria nivea L. Gaud.) Mol Biol Rep 37:2099_2103
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