Determinación de la concentración mínima inhibitoria de Glufosinato de amonio en callos organogénicos de Phaseolus vulgaris L cv. `CIAP7247F'
Resumen
Un sistema de selección eficiente es necesario para distinguir las células transformadas del tejido no transformado. El presente trabajo tuvo como objetivo determinar la concentración mínima inhibitoria del herbicida Glufosinato de amonio en callos organogénicos de Phaseolus vulgaris cv. `CIAP7247F', con el fin de usarlo como agente selectivo en el proceso de transformación genética. Se utilizaron fragmentos de callos de 4-5 mm de diámetro, en el segundo subcultivo de multiplicación. Se empleó el medio de cultivo de proliferación al que se le adicionaron diferentes concentraciones del herbicida (0.10, 0.20, 0.30, 0.40, 0.50 y 0.60 mg l-1). A las ocho semanas de cultivo se cuantificó el número de callos necrosados y se calculó el porcentaje de mortalidad. Además, se describieron las afectaciones provocadas por el agente selectivo en los callos. Todas las concentraciones de Glufosinato de amonio estudiadas produjeron necrosis en los callos de P. vulgaris cv. `CIAP7247F'. El aumento de la concentración de Glufosinato de amonio en el medio de cultivo de proliferación incrementó el porcentaje de callos necrosados. Con las concentraciones de 0.50 y 0.60 mg l-1 el 87.5% y 93.8% de los callos presentaron necrosis total, respectivamente. A partir de las observaciones realizadas se elaboró una escala descriptiva de grados para evaluar las afectaciones provocadas por el agente selectivo en los callos de frijol. Finalmente, se seleccionó 0.50 mg l-1 de Glufosinato de amonio como la concentración mínima inhibitoria, ya que más del 87% de los callos mostraron necrosis total a las ocho semanas de cultivo.
Palabras clave: agente selectivo, callos, frijol, gen bar.
Referencias
Adesoye, AI, Togun AO, Machuka J (2010) Transformation of cowpea (Vigna unguiculata L. Walp.) by Agrobacterium infiltration. Journal of Applied Biosciences 30: 1845-1860
Amugune, N, Anyango B, Mukiana, T K (2011) Agrobacterium-mediated transformation of common bean. African Crop Science Journal 19(3):137-147
Aragao, FJ, Sá MF, Davey MR, Brasileiro AC, Faria JC, Rech, EL (1993) Factors influencing transient gene expression in bean (Phaseolus vulgaris) using an electric acceleration device. Plant Cell Reports 12:483-490
Aragao, FJ, Vianna G, Albino M, Rech E (2002) Transgenic dry bean tolerant to the herbicide Glufosinate Ammonium. Crop Scienced 42:1248_1302
Bayer (2005) Technical information Glufosinate-ammonium. CropScience, p 38
Collado, RL, García RL, Angenon G, Torres D, Romero C, Bermúdez-Caraballoso I, Veitía NR, Ramirez M (2008) Organogénesis indirecta en Phaseolus vulgaris L. cv. CIAP7247. Biotecnología Vegetal 8(2): 81-86
Da Silva, FR, Yuffá AM (2004) Efecto del herbicida glufosinato de amonio en diferentes explantes de Coffea arabica cv. Catimor. Plant Mol Biol. 55: 211-217
De Clercq, J, Zambre M, Van Montagu M, Dillen W, Angenoon G (2002) An optimizad Agrobacterium- mediated transformation procedure for Phaseolus acutifolius A. Gray. Plant Cell Rep. 21: 333-340
Hinchee, MA, Connor-Ward, DV, Newell CA, Mc Donnell RE, Sato SJ, Gasser CS, Fischhoff DA, Re DB, Fraley RT, Horsch RB (1988) Production of transgenic soybean plants using Agrobacterium-mediated DNA transfer. Bio/Technology 6:915-921
Karami, O, Esna-Ashari M, Kurdistani GK, Aghavaisi B (2009) Agrobacterium-mediated genetic transformation of plants: The role of host. Biologia Plantarum 53:201-212
Khalafalla, MM, El-Shemy HA, Mizanur RS, Teraishi M, Ishimoto M (2005) Recovery of herbicide resistant Azuki bean [Vigna angularis (Wild.), Ohwi & Ohashi] plants via Agrobacterium-mediated transformation. African Journal Biotechnol 4(1):61-67
Kosky, RG, Reyes MV, Bermúdez-Caraballoso I, Chong-Pérez B, Alvarado-Capó Y (2010) Nuevo método para la selección rápida de plantas de banano (Musa spp. AAA cv. Grande naine) transformadas con el gen bar procedentes de campo, empleando el glufosinato de amonio. Rev. Colomb. Biotecnología XII(2):248-258
Kwapata, K, Nguyen T, Sticklen M (2012) Genetic transformation of common bean (Phaseolus vulgaris L.) with the GUS Color Marker, the bar herbicide resistance, and the Barley (Hordeum vulgare) HVA1 drought Tolerance Genes. International Journal of Agronomy 2012:1-8
Miki, B, Mc Hugh S (2004) Selectable marker genes in transgenic plants: applications, alternatives and biosafety. Journal of Biotechnology 107:193-232
Miki, B, Abdeen A, Manabe Y, MacDonald P (2009) Selectable marker genes and unintended changes to the plant transcriptome. Plant Biotechnology Journal 7: 211-218
Popelka, JC, Gollasch S, Moore A, Molvig L, Higgins TJ (2006) Genetic transformation of cowpea (Vigna unguiculata L.) and stable transmission of the transgenes to progeny. Plant Cell Report 25:304-312
Sreeramanan, S, Maziah M, Abdullah MP, Rosli NM, Xavier R (2006) Potential selectable marker for genetic transformation in banana. Biotechnology 5 (2): 189-197
Thu, TT, Dewaele E, Trung LQ, Claeys,M, Jacobs M, Angenon G (2007) Increasing lysine levels in pegeonpea (Cajanus cajan (L.) Millsp) seeds through genetic engineering. Plant Cell Tissue and Organ Culture 91:135-143
Varshuey, RK, Close TJ, Singh NK, Hoisington DA, Cook DR (2009) Orphan legume crops enter the genomics era. Current Opinion in Plant Biology 12: 202-210
Zambre, M, Goossens A, Cardona C, Van Montagu M, Terryn N, Angenon G (2005) A reproducible genetic transformation system for cultivated Phaseolus acutifolius (tepary bean) and its use to assess the role of arcelins in resistance to the Mexican bean weevil. Theor Appl Genet. 110: 914-924
Copyright (c) 2016 Biotecnología Vegetal
Biotecnología Vegetal eISSN 2074-8647, RNPS: 2154. ISSN 1609-1841, RNPS: 0397 Editada por: Instituto de Biotecnología de las Plantas. Universidad Central Marta Abreu de Las Villas. Carretera a Camajuaní km 5.5, Santa Clara, Villa Clara, Cuba CP 54 830 Tel: 53 42200124, e-mail: info@ibp.co.cu
Biotecnología Vegetal está bajo una Licencia Creative Commons Atribución-NoComercial 4.0 Internacional.