No 4 2002 
Comunicación corta                                                                         Biotecnología vegetal Vol. 2, No. 4: 227-233, 2002

Estudio del comportamiento in vitro del cultivar de banano FHIA-01 (AAAB) en la fase de multiplicación

Daymí Ramírez Aguilar*, Juan N. Pérez Ponce, Daniel Agramonte Peñalver, Felipe Jiménez Terry, Martha Pérez Peralta, Odalys Gutiérrez Martínez. *Autor para correspondencia.

RESUMEN

En el presente trabajo se evaluaron diferentes combinaciones de reguladores del crecimiento en el medio de cultivo para la fase de multiplicación del cultivar FHIA 01 (AAAB) y el gelificante más eficaz en la fase de multiplicación. Se realizaron varios ensayos donde se estudiaron comparativamente diferentes concentraciones de las auxinas y citoquininas más utilizadas en los medios de cultivos en el género Musa analizando su efecto en la formación de brotes, el coeficiente de multiplicación, la emisión de raíces y la altura de las plantas en la fase de multiplicación. Además se compararon diferentes agentes gelificantes para la Fase de multiplicación. Como resultado se obtuvo que el 6 Bencilaminopurina (6-BAP) a razón de 4.0mg.l-1 permitió la formación de mayor número de brotes y un mayor coeficiente de multiplicación. Las auxinas por su parte afectaron de forma general el desarrollo de los indicadores evaluados en la propia fase aunque el ácido indolacético (AIA) fue la auxina que tuvo un mejor comportamiento y el agente gelificante más efectivo para la fase de multiplicación fue el Phytagel.

Palabras clave: Multiplicación de brotes, Reguladores del crecimiento, Agentes gelificantes

ABSTRACT

In the present work different hormonal combinations were evaluated in the way of culture for the phase of multiplication of the cv. FHIA 01 (AAAB) and the most effective gelificante in the phase of multiplication. Several tests were realized where comparatively different doses of the auxinas were studied and citoquininas more used in the medium of cultures in Musa analyzing his effect in the formation of outbreaks, the coefficient of multiplication, the emission of roots and the height of the plants in the phase of multiplication. Besides different agents were compared gelificantes for multiplication stage. Since result there was obtained that 6 Bencil aminopurina (6-BAP) because of 4.0mg.l-1 allowed the formation of major number of buds and a major coefficient of multiplication. The auxinas on his part affected of general form the development of the indicators evaluated in the own phase though the acid indolacético (AIA) was the auxina that had a better behavior and the agent gelificante more efectiv for the phase of multiplication was the Phytagel.

Key words: shoot of multiplication, growth of regulators,gelificante agents

INTRODUCCIÓN

En Cuba se ha trabajado en la introducción de cultivares de plátanos y bananos de la Federación Hondureña de Investigación Agrícola (FHIA), por su resultados productivos, entre los que se encuentra el cultivar FHIA 01 (AAAB).

Este híbrido conocido como “GOLDFINGER” es derivado del cruzamiento de un diploide resistente a nemátodos (SH-3142) con el “Prata Enano” y es el primer híbrido hecho por el hombre que es resistente a algunas enfermedades que atacan al “Cavendish”, además reúne las cualidades necesarias para la exportación.

Para la introducción acelerada de este cultivar en la producción se requiere el empleo de técnicas biotecnológicas.

Por estas razones se llevó a cabo un trabajo investigativo con los siguientes objetivos:

- Estudiar el comportamiento in vitro del cultivar FHIA-01 (AAAB) en la fase de multiplicación, con vistas a perfeccionar su sistema de micropropagación.

MATERIALES Y MÉTODOS

Se realizaron cuatro experimentos en los que se emplearon explantes procedentes de cuarto subcultivo que se encontraban en un medio de cultivo de multiplicación formado por las sales MS; 4.0 mg.l-1de 6-Bencilaminopurina (6BAP); 1.0 mg.l-1 de Ácido indolacético (AIA) y 3% de sacarosa, en estado semisólido (agar al 0.7%), en todos los casos el pH se ajustó a 5.8.

En todos los ensayos efectuados se realizaron diez repeticiones por tratamiento y se colocaron diez explantes por frascos de 250 ml de capacidad. Se evaluaron tres subcultivos consecutivos en cada experimento teniendo en cuenta la formación de brotes, el coeficiente de multiplicación, la emisión de raíces y la altura de las plantas (cm).

Influencia de diferentes auxinas en la fase de multiplicación

Se compararon diferentes tipos de auxinas, utilizando tres concentraciones de AIA (0.0; 1.0 y 2.0 mg.l –1) y dos iguales de Ácido indolbutírico (AIB) y Ácido naftalenacético (ANA), (0.0 y 0.25 mg.l–1) que originaron 12 variantes de medios de cultivo que además contenía sales MS; 4.0 mg.l-1 6-BAP; Tiamina 1.0 mg.l-1 y 3% de sacarosa.

Tabla 1. Diferentes combinaciones de las auxinas comparadas en el medio de cultivo de multiplicación del cv. FHIA-01 (AAAB).

Influencia de diferentes citoquininas en la fase de multiplicación

Se comparó la acción de diferentes citoquininas, utilizando para ello una concentración de 6-BAP (4.0 mg.l-1), una de Kinetina (Kin) (1.0 mg.l-1), dos de 2- Isopentil Adenina (2ip) (1.0 y 2.0 mg.l-1) y cuatro de Thidiazurón (THI) (0.5; 1.0; 2.0 y 3.0 mg.l-1), en un medio de cultivo que además contenía sales MS; 0.65 mg.l-1 AIA; Tiamina 1.0 mg.l-1 y 3% de sacarosa, estas concentraciones se mantuvieron en el medio de cultivo durante tres subcultivos.

Efecto de la combinación del 6BAP, la KIN y el AIA en la fase de multiplicación

Se compararon tres concentraciones de 6-BAP (2.0; 4.0 y 6.0 mg.l-1) y dos iguales de KIN y AIA ( 0.0 y 1.0 mg.l-1) en un experimento trifactorial originando 12 variantes de medios de cultivo.

Comparación de distintos agentes gelificantes en la fase de multiplicación

Se compararon tres tipos de agentes gelificantes para el medio de cultivo en la fase de multiplicación, Agar, Phytagel y Agargel con las dosis 6.0; 2.0 y 5.0 mg.l-1 respectivamente.

Procesamiento estadístico de los datos

Los datos de los experimentos uno y tres se procesaron mediante un análisis de varianza multifactorial para tres factores en los datos que manifestaron distribución normal y homegeneidad de varianza, complementándose donde fue necesario con la técnica de polinomios ortogonales.

Los datos del experimento dos no cumplían los requerimientos de normalidad por lo que fueron procesados mediante análisis de varianza de clasificación simple no paramétrico (Kruskal-Wallis), complementándose esta con una prueba de comparación múltiple de medias no paramétricas según la metodología descrita por Sanabria y Avila de Moreno (1989). Los datos del experimento cuatro también fueron procesados por análisis de varianza de clasificación simple. Las diferencias entre las medias fue determinada mediante la prueba de rango múltiple de Duncan para el 5%.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Influencia de diferentes auxinas en la fase de multiplicación

En la comparación de diferentes concentraciones de las auxinas (Tabla 2), se demostró que estas influyeron negativamente en la formación de brotes por plantas y en el coeficiente de multiplicación, sin embargo la formación de raíces se vio favorecida lo que constituyó un aspecto negativo en esta fase, lo que coincide con lo referido por Pérez et al. (1998).

En el análisis de los factores individuales, el AIA fue la auxina que menos afectó la formación de brotes, el coeficiente de multiplicación y la altura de las plantas al no manifestar diferencias significativas.

En tanto el número de brotes, el coeficiente de multiplicación y la altura de las plantas disminuyó con la disminución de la concentración de ANA, que provocó además un

ligero aumento en la formación de raíces (Tabla 3), la marcada influencia de esta auxina en la emisión de raíces en la fase de multiplicación puede ser la causa de la disminución del desarrollo del resto de las variables evaluadas en dicha fase. Con el aumento de las concentraciones de AIB también se encontraron diferencias significativas, lo que influyó en el número de brotes y en el coeficiente de multiplicación (Tabla 4).

Influencia de diferentes citoquininas en la fase de multiplicación

En los tres subcultivos realizados hubo diferencias significativas en la formación de brotes y el coeficiente de multiplicación, mostrándose en el primer subcultivo mejores resultados con la utilización de 4.0 mg.l-1 de 6BAP; 1.0 mg.l-1 de KIN; y THI con las dosis 0.5; 1.0; 2.0 y 3.0 mg.l-1 obteniendo con 4.0 mg.l-1 de 6BAP el mayor número de brotes y coeficientes de multiplicación (Figuras 1 y 2).

A medida que se incrementó el número de subcultivos disminuyó el número de brotes y el coeficiente de multiplicación con las diferentes concentraciones de THI, que provocaron la formación de yemas múltiples, las cuales se eliminaron durante el proceso. Resultados similares refirió Orellana (1994) para el cultivar FHIA-01 en relación con el comportamiento diferente del coeficiente de multiplicación con el aumento del número de subcultivos.

La Kinetina también promovió la proliferación y ahijamiento en cada subcultivo, pero no fue tan efectiva como el 6 BAP, ya que además provocó la formación de raíces que se mantuvieron desde primer al tercer subcultivo, condición que no favorece el desarrollo en la multiplicación. Comportamiento similar a la KIN mantuvo el 2ip (Figura 3).

Por otra parte, el 6 BAP favoreció el engrosamiento, así como el alcance de los mayores valores en el indicador altura de los brotes (Figura 4).

Los resultados obtenidos en este experimento indicaron que el 6BAP fue la citoquinina que permitió la formación de las características más adecuadas en la fase de multiplicación del cultivar FHIA-01.

Efecto de la combinación del 6BAP, la KIN y efecto en la fase de la multiplicación de las

el AIA en la fase de multiplicación

El 6 BAP (4.0mg.l-1) fue el único factor que mostró diferencias significativas (Tabla 5) al comparar el citoquininas y auxinas de forma independiente en las variables evaluadas, además no se obtuvieron diferencias significativas en las interacciones entre los factores.

Al analizar el número de brotes se observaron diferencias significativas alcanzando el mayor valor con 4.0mg.l-1 de 6 BAP, además, se obtuvo una disminución con la mayor concentración aplicada al medio de cultivo lo que pudo estar dado por un exceso en la dosis aplicada provocando la inhibición en el incremento en el número de brotes. En cuanto al coeficiente de multiplicación se encontraron diferencias significativas, se logró el mayor coeficiente al aplicar 4.0mg.l-1 de 6 BAP, en este caso tanto la concentración baja (2.0mg.l-1) como la concentración alta (6.0mg.l-1) influyeron negativamente en el ahijamiento. En cuanto al número de raíces también se encontraron diferencias significativas, se obtuvo la menor formación de raíces a medida que fue más alta la concentración de 6BAP. En tanto las evaluaciones del indicador altura no mostraron diferencias significativas. (Figura 5).

Las mejores respuestas in vitro en la fase de multiplicación para el cultivar FHIA-01 se lograron con la aplicación al medio de cultivo 4.0mg.l-1 de 6 BAP

Comparación de distintos agentes gelificantes en la fase de multiplicación

La formación de brotes no estuvo afectada por los diferentes gelificantes utilizados al no existir diferencias significativas entre los diferentes tratamientos. Sin embargo, el coeficiente de multiplicación y la altura de las plantas mostraron diferencias significativas, prevaleciendo en todos los factores evaluados como mejor tratamiento aquel donde se utilizó Phytagel como agente gelificante (Figura 6).

Varios son los investigadores que plantean que el Phytagel puede sustituir a muchos agentes gelificantes, sin afectar la eficacia de los cultivos empleando diversas técnicas de cultivo (Romberger y Tabor, 1971; Debergh, 1983 y Singha et al., 1985).

Resultados similares a los encontrados en el presente trabajo, refirió Berrantes (1994) en el cv. Curraret Musa (AAB) quien encontró que al solidificar un medio de cultivo, que contenía 4.0mg.l-1 de 6BAP, con diferentes agentes gelificantes la mejor consistencia se obtuvo con Phytagel.

CONCLUSIONES

A partir de los resultados alcanzados en la investigación realizada se concluye que para el cultivar FHIA-01 las mejores respuestas in vitro en la fase de multiplicación se lograron con la aplicación al medio de cultivo de 4.0 mg.l-1 de 6BAP y con el empleo del Phytagel como agente gelificante.

REFERENCIAS

Berrantes, W, Acuna P (1994) Influencia de la consistencia de medio de cultivo y concentración de 6BAP en la micropropagación

Debergh, PC (1983) Effects of agar brand and concentration on the tissue culture medium. Physiol. Plantarum 59: 270-276

Pérez, JN, Orellana P, Suárez M y Valdés C (1998). Propagación masiva en biofábricas (Capítulo 14). En: J N Pérez Ponce (Ed). Propagación y Mejora Genética de Plantas por Biotecnología. Instituto de Biotecnología de las Plantas, Universidad Central de Las Villas. Santa Clara, Cuba

Orellana, P (1994) Tecnología para la micropropagación in vitro de clones de Musa spp. Tesis para optar por el grado científico de Doctor en Ciencias Agrícolas. IBP. UCLV. PP. 1-96

Romberger, JA y Tabor CA (1971) The Picea abis shoot apical meristem in culture: Agar and autoclaving effects. Amer. J. Bot. 58: 131-140

Sanabria, RJ y Ávila de Moreno C (1989) Prueba no paramétrica para cuando no se cumple el supuesto de normalidad en el ANAVA de una vía. ICA, 24(2)

Singha, S, Townsend EC y Oberly GH (1985) Mineral nutrient startur of crabapple and pear shoots cultured in vitro on varying concentration of tree commercial agar. J. Amer. Hort. Sci. 110: 407-411



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