Vol.9, No.3 2009.pmd 
Artículo Científico                                                                    Biotecnología Vegetal Vol. 9, No. 3: 189 - 192, julio - septiembre, 2009
ISSN 1609-1841 (Versión impresa)
 ISSN 2074-8647 (Versión electrónica)

Efecto de BAP y ANA en la multiplicación in vitro de Bambusa vulgaris var. vulgaris Schrad. ex Wendl.

Yudith García-Ramírez*, Marisol Freire-Seijo, Blanca Pérez, Ortelio Hurtado *Autor para correspondencia

Instituto de Biotecnología de las Plantas. Universidad Central ‘Marta Abreu’ de Las Villas. Carretera a Camajuaní km 5.5 Santa Clara. Villa Clara. Cuba. CP 54 830 e-mail: yudith@ibp.co.cu

RESUMEN

Bambusa vulgaris var. vulgaris Schrad. ex Wendl. es una especie de bambú de gran importancia económica. Desarrollar protocolos de propagación vía organogénesis y embriogénesis somática sería una alternativa eficiente para propagar esta especie ya que se adapta bien a las condiciones edafoclimáticas de Cuba. Este trabajo se realizó con el objetivo de determinar el efecto de diferentes concentraciones de 6-BAP (1.0, 3.0 y 6.0 mg.l-1) y ANA (0, 0.5, 1.0 mg.l-1) en la multiplicación in vitro de B. vulgaris. Se cuantificó el número de brotes y hojas por explante, así como se midió la altura de las plantas a los veinte días de cultivo. Se demostró que es posible multiplicar Bambusa vulgaris var. vulgaris en medio de cultivo líquido con BAP. La combinación de BAP y ANA en el medio de cultivo no fue efectiva para este propósito. Este resultado contribuye a la solución de una de las limitantes principales de la aplicación de técnicas biotecnológicas en este cultivo.

Palabras clave: bambú, cultivo de tejidos, reguladores de crecimiento

ABSTRACT

Bambusa vulgaris var. vulgaris Schrad. ex Wendl. is a bamboo species of great economic importance. Developing protocols for propagation via organogenesis and somatic embryogenesis would be an efficient alternative to propagate this species since it adapts well to the soil and climatic conditions of Cuba. The aim of this work was to determine the effect of different concentrations of 6-BAP (1.0, 3.0 and 6.0 mg.l-1) and NAA (0, 0.5, 1.0 mg.l-1) on B. vulgaris in vitro multiplication. Number of shoots and leaves per explant were quantified. Also, height of plants was measured on the twentieth day of culture. Multiplication of Bambusa vulgaris var. vulgaris in liquid culture medium with BAP was achieved. Combination of BAP and NAA in the culture medium was not effective for this purpose. The result solves one of the main limitations to use biotechnology techniques in this crop.

Keywords: bamboo, tissue culture, growth regulators

INTRODUCCIÓN

Bambusa vulgaris Schrad. ex Wendl es. una especie multipropósito de rápido crecimiento y proporciona beneficios a los cultivos agrícolas. Se adapta bien a las condiciones edafoclimáticas de Cuba y es empleada en plantaciones y sistemas agroforestales, debido a la protección que le brinda a los suelos y el medio ambiente (Christanty et al., 1997).

La regeneración natural de B.vulgaris se ve afectada por el ciclo largo de floración y poca viabilidad de las semillas. Además, la propagación vegetativa, a través de la división de rizomas, se dificulta debido a los bajos porcentajes de enraizamiento y la poca disponibilidad de propágulos (Reddy y Yekanthappa, 1989). Estos métodos c onstituyen una limitante para la propagación masiva de bambúes (Nadgauda et al., 1990; Mukunthakumar et al., 1999; Koshy y Gopakumar, 2005).

Debido al potencial que posee B. vulgaris, las técnicas de cultivo de tejidos constituyen una herramienta fundamental para la propagación masiva. La organogénesis y la embriogénesis somática son las técnicas más empleadas para la propagación in vitro de diferentes especies de bambúes (Sood et al., 2002; Lin et al., 2004). Aunque se han llevado a cabo varios protocolos de propagación in vitro de bambúes, la contaminación interna de los explantes, los bajos coeficientes de multiplicación y de enraizamiento, además de la baja supervivencia ex vitro constituyen las principales limitantes para la propagación masiva de varias especies de bambúes.

El uso de 6-bencilaminopurina (BAP), ya sea sola o en combinación con kinetina, o con ácido a-naftalenacético (ANA) en el medio de cultivo ha dado lugar a mayor tasa de multiplicación de brotes en especies de bambú (Bag et al.,

2000; Bag et al., 2001; Arshad et al., 2005; Kapoor y Rao, 2006; Ramanayake et al., 2006; Jiménez et al. , 2006).

Por todo lo antes planteado la presente investigación se desarrolló con el objetivo de determinar el efecto de las combinaciones de diferentes concentraciones de BAP y ANA en multiplicación in vitro de B. vulgaris.

MATERIALES Y MÉTODOS

Se utilizaron explantes establecidos in vitro de B.vulgaris según lo informado por García-Ramírez et al. (2007) para Bambusa vulgaris var Vittata con 20 día de cultivo (Figura 1).

El medio de cultivo estuvo compuesto por sales inorgánicas MS (Murashige y Skoog, 1962), mio-inositol (100 mg.l-1) y sacarosa (30 g.l-1). Se conformaron tratamientos a los que se adicionaron tres concentraciones de BAP (1.0, 3.0 y 6.0 mg.l-1) y dos concentraciones de ANA (0.5 y 1.0 mg.l-1). Se utilizó, además, un tratamiento control con las concentraciones de BAP sin la presencia de ANA.

El pH del medio de cultivo fue ajustado a 6.0±1 con el uso de HCl y/o KOH, previo a la esterilización. Los frascos de cultivo empleados en cada tratamiento fueron Erlenmeyer (250 ml de volumen). A cada uno se le adicionaron 50 ml de medio de cultivo y en cada frasco se colocaron cinco explantes.

Para el desarrollo de las plantas, los frascos de cultivo se colocaron en cámaras de crecimiento con luz solar, el flujo de fotones fotosintéticos osciló entre 38.0-45.7 μM.m-2.s-1 y la temperatura fue de 26±2.0°C.

A los 20 días de cultivo se cuantificó el número de brotes por planta, además se midió la altura de la planta principal (cm) desde la base hasta el punto de inserción de la primera hoja y el número de hojas expandidas por cada planta.

Los valores obtenidos fueron analizados mediante una prueba de Kruskall Wallis, previa comprobación de los supuestos de normalidad y homogeneidad de varianza.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Se determinó que solamente el BAP influyó en la multiplicación in vitro de B vulgaris. La emisión de nuevos brotes por planta se hizo visible a partir de la segunda semana de cultivo. A la tercera semana las nuevas plantas incrementaron su altura y expandieron sus nuevas hojas.

A los 20 días de cultivo se observó que el número de brotes por planta se incrementó significativamente a medida que fue mayor la concentración de BAP en el medio de cultivo sin la presencia del ANA (Figura 2). Los mayores valores en cuanto al número de brotes por planta se alcanzaron cuando se emplearon 3.0 y 6.0 mg.l-1 de BAP, con diferencias significativas con el resto de los tratamientos (Tabla 1).

Estos resultados no difieren de los obtenidos por Saxena y Bhojwani (1993) quienes alcanzaron un incremento en la formación de brotes por planta al emplear 6.0 mg.l-1 de BAP durante la multiplicación in vitro de Dendrocalamus longispathus.

Autores como Arya et al. (1999) para D. asper, Kapoor y Rao (2006) para B. bambos, Ramanayake et al. (2006) para B. vulgaris y Jiménez et al. (2006) para G. angustifolia, destacan el papel fundamental que juega el BAP en la proliferación de plantas durante la multiplicación in vitro.

En cuanto a la altura de los explantes se pudo apreciar que se favoreció en la medida que se fueron incrementando las concentraciones de BAP y ANA en el medio de cultivo, con diferencias significativas con el resto de los tratamientos. Esta combinación favoreció el crecimiento de los explantes pero no el número de brotes por planta. No obstante, en algunos casos es necesaria la adición de auxinas para garantizar un balance interno en los tejidos que promueven el crecimiento y diferenciación de los brotes, así como estimule el incremento de las tasas de multiplicación. El número de hojas se favoreció cuando se incrementó la concentración de BAP a 3.0 mg.l-1 con diferencias significativas con el resto de los tratamientos (Tabla 1).

Las combinaciones de BAP y ANA se han utilizado para inducir la formación de brotes en numerosas especies (Huang y Huang, 1995). Estas han demostrado ser efectivas para la formación de brotes por planta (Pérez et al., 1999).

En otras especies de bambúes las combinaciones de diferentes concentraciones de reguladores de crecimiento han tenido un efecto positivo en el incremento del número de brotes y altura por planta durante la multiplicación in vitro (Das y Pal, 2005; Arshad et al., 2005; Sanjaya et al., 2005).

Sin embargo, en Bambusa vulgaris var. vulgaris no tuvieron un efecto positivo las combinaciones de BAP y ANA durante esta etapa. Solo el BAP influyó en el incremento de número de brotes por planta, esto pudiera estar dado ya que los requerimientos en cuanto a tipo y concentraciones de reguladores del crecimiento varían en función de la especie (Marulanda et al. ,2002).

CONCLUSIONES

Se demostró que es posible multiplicar Bambusa vulgaris var. vulgaris en medio de cultivo líquido con BAP. La combinación de BAP y ANA en el medio de cultivo no fue efectiva para este propósito. Este resultado contribuye a la solución de una de las limitantes principales de la aplicación de técnicas biotecnológicas en este cultivo.

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