Determinación de la concentración mínima inhibitoria de Geneticina G418 en el proceso de formación de callos de Digitalis purpurea L.
Resumen
Digitalis purpurea L. produce glicósidos cardiotónicos, como digoxina y digitoxina, los cuales se utilizan para el tratamiento de enfermedades cardíacas. Los estudios genómicos en esta especie se han visto limitados por la ausencia de un sistema de transformación genética eficiente. Uno de los primeros pasos para establecer una tecnología de transformación es la obtención de un método y agente para seleccionar células transformadas de las no transformadas. En el presente estudio, se determinó la concentración mínima inhibitoria de Geneticina G-418 en la formación de callos en segmentos de hojas de esta planta. Además, se evaluó el efecto de las concentraciones entre 10-50 mg.l-1 en los segmentos de hojas, para lo que se desarrolló una escala evaluativa basada en el porcentaje de tejido que no formó callo. Ningún explante formó callos cuando los fragmentos de hojas fueron cultivados con una concentración de 50 mg.l-1 de Geneticina G-418, por lo que se consideró esta concentración como la mínima inhibitoria y fue seleccionada para futuros trabajos de transformación genética en esta especie.
Palabras clave: digoxina, NPTII, selección, transformación genética
Referencias
Ballester, A, Cervera M, Peña L (2008) Evaluation of selection strategies alternative to nptII in genetic transformation of citrus. Plant Cell Report 27: 1005–1015
Bevan, MW, Flavell RB, Chilton MD (1983) A chimaeric antibiotic resistance gene as a selectable marker for plant cell transformation. Nature 304: 184–187
Cowan T (2004) The Fourfold Path to Healing. Digitalis. [en línea]. Disponible en: http://www.fourfoldhealing.com/ Digitalis.htm [Consulta: Octubre de 2006]
Eady, CC, Weld JJ, Lister CE (2000) Agrobacterium tumefaciens mediated transformation and transgenic-plant regeneration of onion (Allium Cepa L.). Plant Cell Rep 19:376–381
Elliott, AR, Campbell JA, Dugdale B, Brettell RIS, Grof CPL (1999) Green-fluorescent protein facilitates rapid in vivo detection of genetically transformed plant cells. Plant Cell Rep 18: 707–714
Fraley, RT, Rogers SG, Horsch RB, Sanders PR, Flick JS, Adams S P, Bittner ML,Brand LA, Fink CL, Fry JS, Gallupi GR, Goldberg SB, Hoffman NL, Woo SC (1983) Expression of bacterial genes in plant cells. Proc Natl Acad Sci USA 80: 4803-4807
Gavidia, I, Pérez-Bermúdez P, Seitz HU (2002) Cloning and expression of two novel aldo-keto reductases from Digitalis purpurea leaves. Eur. J. Biochem. 269: 2842–2850
Gavidia, I, Tarrío R, Rodrðíguez-Trelles F, Pérez-Bermúdez P, Seitz HU (2007) Plant progesterone 5â-reductase is not homologous to the animal enzyme. Molecular evolutionary characterization of P5âR from Digitalis purpurea. Phytochemistry 68: 853–864
Herrera-Estrella, L, De Block M, Messens E, Hernalsteen JP, Van Montagu M, Schell J (1983) Chimeric genes as dominant selectable markers in plant cells. EMBO J 2: 987–995
Miki, B, McHugh S (2004) Selectable marker genes in transgenic plants: applications, alternatives and biosafety. J. Biotech 107: 193–232
Murashige, T, Skoog F (1962) A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol Plant 15:473-497
Parveez, G, M Chowdhury, Saleh NM (1996) Determination of minimal inhibitory Concentration of selection agents for Oil Palm (Elaeis guineensis Jacq.) transformation. Asia Pac. J. Mol. Bio. Biotechnol. 4: 219-228
Peña, L, Cervera J, Juárez J, Navarro A, Pina JA, Navarro L (1997) Genetic transformation of line (Citus aurantifolia Swing.): factors affecting transformation and regeneration. Plant Cell Rep 16: 731-737
Remy, S, Thiry E, Coemans B, Windelinckx S, Swennen R, Sàgi L (2005) Improved T-DNA vector for tagging plant promoters via high-throughput luciferase screening. BioTechniques 38:763-770
Saito, K, Yamazaki M, Shimomura K, Yoshimatsu K, Murakoshi I (1990) Genetic transformation of foxglove (Digitalis purpurea)by chimeric foreign genes and production of cardioactive glycosides. Plant Cell Reports 9: 121-124
Spencer, TM, WJ Gordon-Kamm, RJ Daines WG Start, PG Lemaux (1990) Bialaphos selection of stable transformants from maize cell culture. Theor. Applied Genet 79: 625-631
Sreeramanan, S, Maziah M, Abdullah P, Rosli M (2006) Potential selectable marker for genetic transformation in banana. Biotechnology 5 (2): 189-197
Schwinger, RHG, Bundgaard H, Muller-Ehmsen J, Kjeldsen K (2003) The Na, K-ATPase in the failing human heart. Cardiovasc. Res. 57: 913–920
Tadesse, Y, Sàgi L, Swennen R, Michel J (2003) Optimisation of transformation conditions and production of transgenic sorghum (Sorghum bicolor) via microparticle bombardment. Plant Cell, Tiss. Org. Cult 75: 1-18
Copyright (c) 2016 Biotecnología Vegetal
Biotecnología Vegetal eISSN 2074-8647, RNPS: 2154. ISSN 1609-1841, RNPS: 0397 Editada por: Instituto de Biotecnología de las Plantas. Universidad Central Marta Abreu de Las Villas. Carretera a Camajuaní km 5.5, Santa Clara, Villa Clara, Cuba CP 54 830 Tel: 53 42200124, e-mail: info@ibp.co.cu
Biotecnología Vegetal está bajo una Licencia Creative Commons Atribución-NoComercial 4.0 Internacional.