Empleo de los agentes selectivos Geneticina G-418 e Higromicina B para la transformación genética en Phaseolus vulgaris variedad CIAP 72-47

Resumen

Las leguminosas son una fuente de proteína muy importante en la dieta tanto humana como animal y de estas las del género Phaseolus son las más empleadas en la nutrición. La mayoría de los sistemas de transformación genética descritos hasta el momento requieren seleccionar las plantas que contengan el transgen introducido mediante un marcador de selección. La utilización de uno u otro, requiere que primero se determinen las concentraciones adecuadas de este y su efecto inhibitorio en el crecimiento de los explantes. Por lo tanto, el objetivo del presente trabajo fue determinar la concentración mínima inhibitoria de los antibióticos Geneticina G-418 e Higromicina B que inhibieran el crecimiento de explantes de Phaseolus vulgaris var. CIAP 72-47. Como material vegetal se utilizaron segmentos de tallo de 5-6 mm de longitud que contenían el nudo cotiledonal y habían sido obtenidos a partir de semillas maduras. Para la selección se empleó el medio de cultivo de inducción de brotes al que se adicionaron diferentes concentraciones de Geneticina G-418 (0, 20, 30, 40, 50 y 60 mg.l^-1) o Higromicina-B (0, 10, 15, 20 y 25 mg.l^-1). Las evaluaciones se realizaron a las ocho semanas y se determinó el número de explantes con yemas múltiples regeneradas, así como el número de explantes necrosados. Se encontró que el antibiótico Geneticina G-418 inhibió totalmente el desarrollo de las yemas múltiples y el tejido se necrosó (100%) a partir de la concentración de 50 mg.l^-1. No se logró la regeneración de yemas en el segmento de tallo, y esto difirió estadísticamente del resto de los tratamientos, por lo que se seleccionó como la concentración mínima inhibitoria. Para el caso del antibiótico Higromicina-B, se logró la inhibición del desarrollo de las yemas múltiples a concentraciones por encima de 20 mg.l^-1, el explante se tornó necrótico y no fue posible la regeneración de yemas múltiples, por esta razón se seleccionó como la mínima concentración inhibitoria de este agente selectivo para ser utilizada en los experimentos de transformación genética de Phaseolus vulgaris variedad CIAP 72-47.

Palabras clave: frijol, transformación genética, yemas múltiples